Expresión de antígenos de fiebre aftosa en amplicones virales basados en el virus X de la papa.

Abstract

El presente trabajo de Tesis propone el desarrollo de vectores para la expresión de antígenos de aftosa

en amplicones virales utilizando sistemas no integrativos. El objetivo general es establecer sistemas de

expresión eficientes que puedan luego ser utilizados para la producción de plantas transgénicas que expresen

virus quiméricos. El sistema de expresión no integrativo se basa en la utilización de una copia completa

del genoma del virus PVX cuya expresión se encuentra dirigida por el promotor 35S de CaMV. Se construyeron

amplicones recombinantes que permiten expresar los diferentes antígenos de aftosa (A, VP1 y P1)

como proteína de fusión a la cápside viral produciendo viriones quiméricos. La capacidad replicativa de

dichos amplicones se evaluó por agroinfiltración de plantas de tabaco. La expresión de la cápside viral

fusionada a los antígenos se analizó por Western blot con anticuerpos anti-cápside y anti-epitope A de

aftosa. La estabilidad genética de los amplicones virales se evaluó a través de sucesivas infecciones de

plantas de tabaco con los viriones quiméricos analizando la capacidad de retención de la secuencia insertada

en el genoma viral. Los resultados obtenidos permitieron determinar que el tamaño máximo de la secuencia

que puede ser expresada como fusión a la cápside viral es de 800pb. Los amplicones recombinantes que

contienen los antígenos A y VP1 como fusión a la cápside viral fueron capaces de replicarse y de producir

viriones quiméricos estables, no así el amplicón conteniendo el antígeno P1 que sufrió recombinación perdiendo

la secuencia insertada.